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關于鴉片面膜中的禁限用物質——“糖皮質激素”的檢測全面解決方案匯總近日廣東省食藥監抽檢網購面膜發現，超過20%的面膜中非法添加了糖皮質激素，這種被稱為“皮膚鴉片”的物質是一類甾體激素，依據《化妝品衛生規范》中提到這類物質是嚴禁違法濫用添加于化妝品，若將其作為細嫩美白肌膚的功效成分，其會破壞人體激素平衡，如果長期使用，人體皮膚會產生激素依賴癥狀，停用后反而會加重皮膚過敏，出現紅斑、丘疹、毛細血管擴張等嚴重問題，激素依賴性皮炎發病只需要大約兩周時間，但是治療起來卻是一個漫長而棘手的過程。 作為實驗室綜合供應商的廣州綠百草整理了一些儀器公司針對GBT 24800.2-2009化妝品中四十一種糖皮質激素的測定——液相色譜串聯質譜法和薄層層析法的全年解決方案進行了匯總，以便廣大檢測單位以及人員參考。 實驗過程用到的整套標準品如下：
Aglinet — 化妝品中 41 種糖皮質激素類藥物的測定 樣品前處理 稱取 0.2 g 樣品，加入3 mL飽和食鹽水和2 mL乙腈（2次）渦旋（IKA Vortex Genius 3）提取目標物。合并二次提取的 4 mL 乙腈，加入 40 mL 水、0.2 mL亞鐵氰化鉀、0.2 mL 醋酸鋅，混勻后 5000 rpm 離心 10 min。上清液倒入 Bond Elut Plexa 聚合物小柱 60 mg/3 mL（上接 50 mL磨口漏斗），按固相萃取凈化過程獲得液質上機液。
色譜和質譜條件 儀器： Agilent 1260Infinity 液相色譜/6410三重四極桿液質聯用系統 色譜柱：Agilent ZORBAXSB-C18，2.1 × 50 mm，1.8 μm， 部件號 827700-902 進樣量：2μ-L 流動相： A) 含 0.1% 乙酸的水溶液 B) 含 0.1% 乙酸的乙腈溶液 梯度洗脫： 時間/min %B 0 32 3.0 32 12.0 75 14.0 75 14.1 32 流速：0.3 mL/min 柱溫：30℃ 分離時間：16 min 離子源：ESI 干燥氣流量：5 L/min 干燥氣溫度：350℃ 霧化器壓力：38 psi
化妝品劑型多樣、基質復雜，所涉及的 41 種糖皮質激素的藥效從弱效、中效、強效到超強效，分子特征為 17 碳原子環戊烷并多氫菲母核上具有不同基團的修飾，差異較大。從化妝品中完整提取并純化出數十種待測目標物，并進一步建立多組分色譜分離、質譜測定仍有很多困難。因此，好的樣品前處理方法非常關鍵。本文中使用的 Bond Elut Plexa 小柱，具有純化效果好、回收率高、流速快的特點，可以很好的用在大批量樣品檢測中，可作為化妝品中 41 種糖皮質激素檢測的參考方法。 賽默飛世爾科技解決方案 - TSQ Quantum Access Max三重四極桿液質聯用系統同時定量化妝品中41種糖皮質激素 儀器方法 色譜系統：Accela 600快速液相色譜系統 色譜柱：Hypersil Gold C18(50×2.1mm, 1.9μm) 流動相：水（含0.1%甲酸）/乙腈（含0.1%甲酸） 流速：400μL/min； 進樣量：10μL 梯度條件：
質譜系統：TSQ Quantum Access Max三重四極桿 質譜條件： 離子化方式：HESI-Ⅱ 極性模式：正離子 霧化溫度：300℃ 鞘氣：40 arb 輔助氣：15 arb 離子傳輸管溫度：300℃ 質譜掃描參數： 掃描方式：t-SRM 掃描循環時間：0.3 s 分辨率：Q1分辨率分別設置為0.4和0.7 FWHM 標準曲線樣品及基質樣品的配制 取含41種糖皮質激素的混合對照品溶液，各組分濃度均為0.5 μg/ml，稀釋至0.5ng/mL、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml，作為標準曲線工作樣品。分別取空白爽膚水及精華液基質溶液，過濾膜后，配制成含20%乙腈的基質溶液，并以此基質溶液稀釋樣品至0.1ng/mL和0.5ng/mL。 結果與討論 色譜條件的優化 色譜柱的選擇：分別考察了Hypersi l Gold C18 (50×2.1mm, 1.9μm)和Hypersil ODS C18(10×2.1mm, 3μm) 2根規格不同的C18色譜柱對41種激素成分的分離效果。結果表明，前者對41中組分中色譜保留行為非常相似的物質能實現更好的分離，且由于前者粒徑小，能獲得更高的柱效。同時，由于Accela 600液相泵系統耐壓能力強，可使用高流速而大大減少色譜分離所需時間。
流動相及洗脫條件的選擇：分別考察了甲醇/水（0.1%甲酸）、乙腈/水（0.1%甲酸）等流動相系統對于41種激素成分的分離效果。結果表明，采用乙腈（0.1%甲酸）/水（0.1%甲酸）系統進行梯度洗脫更有利于41種激素的色譜分離?？紤]到化妝品基質的影響，延后目標組分的保留時間可減小基質的干擾，因此降低初始流動相中乙腈的比例至20%，得到的譜圖。
質譜條件的優化 根據待測糖皮質激素分子結構及參考國標[12] ,選擇ESI(+) 作為離子化模式 ,將0.5μg/ml的標準液通過蠕動泵連續進樣，由TSQ Tune質譜參數優化軟件自動獲得最佳的子離子、碰撞能量及透鏡電壓。最終所選擇的母離子、特征離子和碰撞能量詳見表 1。圖3為部分糖皮質激素的提取離子流圖（0.5ng/mL）。附表1：離子對信息：母離子、特征離子、碰撞能量和掃描時間。
方法學考察 靈敏度及線性：將標準曲線樣品（0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml 、25ng/ml、50ng/ml 、100ng/ml）依次進樣，以峰面積對濃度繪制標準曲線，各激素成分在0.5-100ng/ml范圍內的線性相關系數大于0.99（見表2）；基質中各種激素的最低檢出限為0.1ng/ml，最低定量限為0.5ng/mL。精密度：取0.5ng/ml基質加標溶液重復進樣5次，各色譜峰保留時間穩定，精華液基質中各組分峰面積的RSD≤9.74%（見表2）；爽膚水基質中各組分峰面積的RSD≤9.77%（見表2）。結果表明該方法穩定、可靠。
不同分辨率設置對方法靈敏度的影響以精華液基質樣品為例，考察儀器分辨率設置對靈敏度的影響：下圖中同行左側色譜圖為0.7FWHM條件下獲得，右側為0.4FWHM條件下獲得。
實驗結論 本實驗應用Thermo ScientificTSQ Quantum Access Max三重四極桿液質聯用系統，建立了41種糖皮質激素同時測定的方法，以基質樣品為主考察了方法的靈敏度及重現性，同時考察了儀器不同分辨率設置對化合物檢測的影響。本方法對化妝品基質中41種糖皮質激素的定量下限為0.5ng/mL，最低檢測限可達0.1ng/mL。通過提高Q1的分辨率能有效降低基質干擾，提高部分化合物的靈敏度。分別以爽膚水空白基質、精華液空白基質與對照液進樣比較，由色譜圖可看出所建立的方法特異性高，能用于化妝品中41種糖皮質激素的檢測。分別在爽膚水基質、精華液基質中添加41種糖皮質激素，濃度均為0.5ng/mL，各連續重復進樣5針方法重現性良好。TSQ QuantumAccess Max三重四極桿液質聯用系統配有可加熱的電噴霧電離源、聚焦離子束的透鏡組件、90度彎曲碰撞池等，可有效提高信號響應，并降低中性噪音，是化妝品中痕量非法添加成分檢測的最佳選擇。 本方法采用Thermo scientificTSQ Quantum Access Max三重四極桿質譜系統，建立了同時定量爽膚水和精華油中41種糖皮質激素的液質聯用法，最低定量限為0.5ng/ml，檢測限為0.1ng/ml。該方法簡便、快速、特異性強且靈敏度高，可應用于化妝品的實際檢測。 最后附上原GBT 24800.2-2009國標中推薦用到的儀器耗材清單：
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